Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Non-static method Red_Item::get_for_url() should not be called statically, assuming $this from incompatible context in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-content/plugins/redirection/modules/wordpress.php on line 31 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: call_user_func_array() expects parameter 1 to be a valid callback, non-static method GoogleSitemapGeneratorLoader::Enable() should not be called statically in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/plugin.php on line 406 Реакция агглютинации (РА) или прямая РА | БГМУ

Реакция агглютинации (РА) или прямая РА

Дисциплина: Микробиология | Комментировать



Агглютинация — это склеивание и выпадение в осадок микроорганизмов или других клеток (корпускулярных антигенов) под действием специфических антител в присутствии электролитов.

РА применяется для серологической диагностики инфекционных заболеваний (реакция Видаля — при брюшном тифе и паратифах, р. Вейгеля — при эпидемическом сыпном тифе, р. Райта — при бруцеллезе и др.) и для серологической идентификации микробов.
В РА участвуют 3 ингредиента:
1) корпускулярный АГ (агглютиноген);
2) антитело (агглютинин);
3) изотопический раствор хлорида натрия (электролит).
Антигены — взвесь живых и убитых микроорганизмов.
Идентификацию вида (серотила) микроба, выделенного от больного или внешней среды, определяют по известному антителу (диагностической иммунной сыворотки). Положительный результат реакции укажет на то, что неизвестный микроб идентичен тому, который был взят в качестве антигена для приготовления иммунной диагностической сыворотки.

Для приготовления взвеси испытуемого микроорганизма суточную агаровую культуру бактерий смывают 1-2 мл физиологического раствора, доводя концентрацию до 2-х млрд. микробных клеток в 1 мл.

При определении неизвестных антител в сыворотке крови больного или реконвалесцента принято пользоваться заранее заготовленными диагностикумами — микробами, убитыми формалином, спиртом, прогреванием, которые готовятся в производственных условиях.

При лабораторной диагностике некоторых инфекционных заболеваний, например, брюшного тифа и паратифов, имеет значение раздельное определение О- и Н-антител в исследуемых сыворотках, т.к. время их появления у больных и сохранение у реконвалесцентов различно. Для этих исследований необходимо располагать соответственно О- и Н-диагностикума-ми. Для приготовления жгутикового Н-антигена к взвеси агаровой культуры микробов в физиологическом растворе добавляют 0,2 % формалина и выдерживают при 37 °С в течение 24 часов О-диагностикум получают прогреванием пробирки со смывом агаровой культуры соответствующего микроба в кипящей водяной бане в течение 1,5-2 часов.

Антитела (сыворотки):
а) Испытуемая сыворотка от больного или реконвалесцента получается из крови, взятой стерильно из локтевой вены в количестве 1-2 мл в стерильную пробирку; оставляют на 1 час при комнатной температуре или при 37 °С на 30 минут. Образовавшийся сгусток отделяют от стенок пробирки бакпетлей, затем пробирку оставляют в холодильнике на ночь. Кровь цен-грифугируют и отсасывают сыворотку.

Готовят последовательно, чаще двукратные разведения сыворотки. Обычно разводят в соотношении от 1:50 до 1 800.

Количество неизвестных агглютинирующих антител в сыворотке оценивается по титру — наибольшему разведению сыворотки, которое еще дает реакцию агглютинации (выпадение осадка — агглютинат).

б) Агглютинирующая диагностическая иммунная сыворотка готовится в производственных условиях путем иммунизации кроликов (реже лошадей) соответствующими антигенами (взвесью живых или убитых микроорганизмов, эритроцитов и т.д.).

Полученную иммунную сыворотку, определив его титр, разливают по ампулам с добавлением консерванта. Иногда употребляют высушенную сыворотку.

Изотонический раствор хлорида натрия — 0,85 % химически чистой поваренной соли, рН 7,2-7,4.
РА должна сопровождаться контролем АГ и контролем АТ (сыворотки) для исключения спонтанной самопроизвольной агглютинации, которая может наступить в 2-х случаях:
а) при потере антигеном специфичности (он диссоциирован на 5-формы в Р);
б) при изменении рН реакции в кислую сторону.

Существует два основных метода постановки РА:
1) ориентировочная РА на предметном стекле, наступающая в течение нескольких минут. Применяется только с целью идентификации вида (серотипа) выделенной из организма больного чистой культуры по его специфичности как АГ к серотипу АТ;
2) развернутая РА в пробирках, которая учитывается через 2 часа выдерживания при 37 «С и на следующий день стояния при комнатной температуре. Применяется с целью идентификации микроба и обнаружения АТ в сыворотке крови.

РА входит в группу методов, в которых реакция протекает в две фазы:
1) соединение АГ с АТ (специфическая фаза)
2) выпадение образовавшегося комплекса АГ-АТ (агглю-тината) в растворе солей (электролите) в осадок (неспецифическая фаза).

Антигены поливалентны, а антитела — двух (ИгО) или более (ИгМ) валентны. Соединение их приводит к образованию макроконгломератов, выпадающих в осадок. Причем характер осадка зависит от свойств антигена: жгутиковые бактерии, имеющие Н-АГ. склеиваются жгутиками, при этом образуются крупнохлопчатый осадок^ который наступает а течение двух часов при 37 «С, У безжгутиковых бактерий, имеющих соматический О-АГ, происходит склеивание непосредственно самих клеток и образование мелкозернистого осадка. Такой осадок образуется медленно, в течение 18-24 часов при комнатной температуре.

Достоинства РА: простота постановки и экспрессность.
Недостатки: уступает по специфичности и чувствительности.

Нет сходных материалов(