Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: Non-static method Red_Item::get_for_url() should not be called statically, assuming $this from incompatible context in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-content/plugins/redirection/modules/wordpress.php on line 31 Strict Standards: Only variables should be passed by reference in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/pomo/mo.php on line 210 Strict Standards: call_user_func_array() expects parameter 1 to be a valid callback, non-static method GoogleSitemapGeneratorLoader::Enable() should not be called statically in /var/www/bsmy.ru/data/www/bsmy.ru/wp-includes/plugin.php on line 406 Реакция пассивной агглютинации (РПА) | БГМУ

Реакция пассивной агглютинации (РПА)

Дисциплина: Микробиология | Комментировать



Иод РПА понимают реакцию, а которой АТ-а взаимодействуют с высокодисперсными АГ (гаптенами), предварительно адсорбированными на корпускулярных носителях, которые при этом склеиваются.
В качестве корпускулярных носителей применяют эритроциты животных, частицы латекса (полимерные микрошарики), бентонита, сефарозы, клетки St. Aureus (штам, содержащий протеин А).

Различают 3 -гипа РПА:
1) различные варианты РПГА (реакции пассивной (емаг-. глютинации);
2) Р. коагглютинации;
3) Р латексаагглюгинации.

1. РПГА — реакция пассивной гемагглютинации.
В основе лежит агглютинация сенсибилизированных эритроцитов РПГА, как правило подразумевает использование эритроцитов, сенсибилизированных АТ-ми.
Эритроциты используются нативные и фиксированные (формальдегидом, глутаровым альдегидом, хлоридом хрома и др).

Ингредиенты реакции РПГА:
1) растворимый (высокодисперсный) АГ (белки, полисахариды и др );
2) эритроциты (носитель);
3) АТ (испытуемая сыворотка или диагностическая иммунная сыворотка; обычно разводят в соотношении от 1:10 до 1:20480);
4) изотонический раствор хлорида натрия.

Реакцию инкубируют сначала при 37 ‘С з течение 2 часов, затем при комнатной температуре в течение 18-24 часов.

При положительной реакции, в результате образования комплекса (АГ-АТ) на поверхности эритроцитов, последние склеиваются и равномерно покрывают все дно пробирки или всю лунку пластинки в виде зонтика с неровными краями. При отрицательной реакции скопление эритроцитов имеет вид меленького диска с ровными краями («пуговки»).

Ставят контроли специфичности реакции с иммунной антисывороткой (положительная реакция) и нормальной сывороткой (отрицательная реакция).

Контролем спонтанной агглютинации эритроцитов служат реакции со взвесью сенсибилизированных и не сенсибилизированных эритроцитов в разведенной нормальной сыворотке.

Недостатки:
1) трудность стандартизации эритроцитов при изготовлении диагностикумов;
2) небольшой срок хранения диагностикумов, Достоинства: простота и дешевизна.
Эти СР широко применяются. Например, состояние иммунитета против дифтерии у детей и подростков проверяют с помощью РПГА с дифтерийным эригроцитарным диагностикумом (анатоксинным). Неиммунными считаются лица с титром антитоксина менее 0,03 МЕ/мл (1:20).

Необходимые ингредиенты:
1. испытуемая сыворотка;
2. диагностикум дифтерийный эритроцитарный;
3. физиологический раствор;
4. противодифтерийная контрольная сыворотка с активностью ЮМЕ/мл:
5. полистироловые пластины (при их отсутствии — пробирки). Испытуемую сыворотку разводят физ. раствором от 1:10 до 1:20480 в 12 лунках. Реакция ставится в объеме 0,8 мл. Вносят по 1 капле диагностикума в каждую лунку.

Противодифтерийную контрольную сыворотку (с активностью 10 МЕ/мл) разводят от 1:10 до 1:20480 и вносят также по 1 капле диагностикума.

Оставляют при комнатной температуре на 3 часа (максимум на 15-20 часов) и читают реакцию.

Учет реакции проводят по степени агглютинации эритроцитов, которую оценивают по 4-кратной системе:
+ + + + агглютинировавшие эритроциты ровным слоем выстилают все дно лунки, образуя по форме перевернутый купол, края купола иногда заворачиваются;
+ + + в верхней части агглютината отмечается более широкое плотное кольцо;
+ + в верхней части агглютината более широкое плотное кольцо из эритроцитов, но меньшее по диаметру;
+ — на дне лунки образуется широкое плотное кольцо из эритроцитов; но меньшее по диаметру;
- — на дне лунки имеется плотный диск или плотное широкое кольцо, но уменьшенного диаметра, по сравнению с реакцией в +.

Титром антитоксина в исследуемом материале считают последнее максимальное разведение, которое еще вызывает агглютинацию титра антитоксина испытуемой сыворотки.

Расчет активности испытуемой сыворотки производят по формуле:
Х = (10А)/В, где:
X — активность испытуемой сыворотки в МЕ/мл;
10 — титр контрольной сыворотки в МЕ/мл;
А — максимальное разведение испытуемой сыворотки с положительным результатом;
В — максимальное разведение контрольной сыворотки с положительным результатом.

2. Реакция коагглютинации, латексагглютинации.
Диагностикум содержит стафилококки для коагглютинации и частицы латекса для латексреакции, на поверхности которых находятся АТ-ла

В случае с фиксированными клетками стафилококка связывание АТ происходит за счет взаимодействия Рс-участками 1дС с молекулами протеина А. При получении латексных диаг-ностикумов используют химическое связывание АТ или АГ с полимерной основой частиц или взаимодействие, основанное на гидрофобных силах.

Достоинства: простота постановки.
Недостаток: возможность неспецифической агглютинации.

Нет сходных материалов(